Contente
- Instruções
- Preparando os materias
- Colocando os esporos nas placas
- Isolando uma cultura pura
- Preparação da prole
- Inoculando o substrato para crescimento de cogumelos
- Dicas
- Aviso
- O que você precisa
Cogumelos podem ser cultivados a partir de esporos ou cultura de tecidos. Cultivos de esporos resultam em populações de cogumelos geneticamente diferentes. Ele é útil quando se deseja isolar e testar novas cepas. Os procedimentos para desenvolvimento de cogumelos são espécie-específicos. Supõe-se que o produtor saiba como cultivar um cogumelo de interesse, em particular, uma vez que prole o suficiente tenha sido obtida.
Instruções
Uma coleção de cogumelos Agaricus (Photos by Ian Grant, Jason Hollinger)-
Prepare 500 a 1000 ml de MEA, de acordo com as instruções do fabricante.
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Coloque a solução de cloreto de sódio nos tubos de ensaio e o MEA nos frascos Erlenmeyer. Não encha os tubos e frascos mais do que até a metade e cubra levemente.
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Esterilize a solução de cloreto de sódio, MEA e placas de Petri (caso não sejam estéreis) em uma panela de pressão, à 121 graus Celsius e 1 atm, por 15 a 20 minutos.
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Remova o MEA, a solução cloreto de sódio e as placas de Petri da panela de pressão e deixe esfriar.
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Quando o MEA tiver esfriado o suficiente para que seja manejado, mas antes de solidificar, levante a tampa de cada placa de Petri cuidadosamente e coloque de 10 a 20 ml de MEA fundido.
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Deixe as placas de MEA e cloreto de sódio esfriarem à temperatura ambiente.
Preparando os materias
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Esterilize o gancho em uma lamparina de álcool. Deixe que o fio esquente até ficar vermelho e, então, deixe esfriar por 5 segundos.
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Mergulhe o gancho na solução de cloreto de sódio para coletar uma gota de fluido. Espalhe a gota sobre uma pequena área na impressão dos esporos (ou outra fonte de esporos) para criar uma mistura líquido/esporos. Repita esse processo diversas vezes, esterilizando o gancho entre cada uma.
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Mergulhe o gancho na suspensão de cloreto de sódio e esporos, para coletar esporos.
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Erga a tampa da placa de ágar apenas o suficiente para permitir acesso para o gancho.
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Espalhe a suspensão de esporos do gancho sobre a superfície do ágar e pegue a placa novamente. Repita com quantas placas você desejar (pelo menos cinco ou seis).
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Feche as placas de ágar com filme plástico para prevenir o ressecamento. Incube os esporos a temperatura e condições de iluminação adequadas para as espécies.
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Observe as placas a cada poucos dias, procurando por sinais de germinação. Um crescimento branco felpudo (um micélio) na superfície do ágar, indica a presença de um fungo (mas pode não ser um fungo que cresceu à partir dos esporos).
Cultivando cogumelos a partir de esporos
Colocando os esporos nas placas
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Compare o micélio com descrições publicadas do micélio que você está tentando cultivar.
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Se o micélio parecer com o esperado, purifique a cultura, cortando pedaços e transferindo-os para placas de ágar fresco.
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Continue cortando pedaços da ponta das colônias em expansão, até que uma colônia pura e livre de bactérias seja obtida.
Isolando uma cultura pura
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Corte e transfira pedaços de micélio purificado para jarras de fibras esterilizadas ou substrato de lascas de madeira. O tipo de substrato usado depende da espécie do cogumelo.
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Incube os micélios principais em condições adequadas para a espécie, até que o substrato esteja completamente colonizado com micélios.
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Agite os recipientes dos micélios periodicamente para fragmentar o substrato e agilizar a colonização.
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Use os micélios principais para inocular outros recipientes e produzir mais micélios.
Preparação da prole
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Agite os recipientes dos micélios vigorosamente, para fragmentar os mesmos.
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Coloque os micélios em sacos ou bandejas de substrato para o crescimento de cogumelos.
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Misture cuidadosamente os micélios no substrato, mexendo ou agitando.
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Proceda de acordo com métodos publicados sobre como cultivar o micélio e iniciar o processo de frutificação das espécies sendo cultivadas.
Inoculando o substrato para crescimento de cogumelos
Dicas
- Trabalhe rapidamente quando estiver despejando o ágar ou transferindo o inóculo, para reduzir a contaminação.
- Tempo e esforço podem ser poupados, comprando placas de ágar estéreis e pré-preparadas.
- O MEA é um bom meio geral para o cultivo de cogumelos, mas outro tipo de meio pode ser mais apropriado, dependendo da espécie.
Aviso
- Panelas de pressão podem ficar quentes e causar ferimentos. Siga as instruções de manutenção e operação do fabricante.
- Recipientes esterilizados são quentes e precisam ser manejados com luvas resistentes ao calor, para evitar queimaduras e derramamentos.
- Deixe as tampas dos recipientes sendo esterilizados soltas, para permitir que a pressão equalize durante o processo de aquecimento e resfriamento.
- Todos os recipientes a serem esterilizados devem ser feitos de material autoclavável.
O que você precisa
- Esporos de cogumelos
- Ágar de extrato de malte (MEA)
- Placas de Petri (pratos)
- Substrato adequado para as espécies
- Lamparina de álcool
- Gancho de inoculação
- Solução de cloreto de sódio (0.9 por cento W/V)
- Panela de pressão
- Tubos de ensaio
- Frascos Erlenmeyer
- Filme plástico
- Jarras ou sacos para a produção de micélios